热盐水试验

日期：2023-05-03 16:50 栏目：症状检查浏览：次

热盐水试验是利用热盐水对血细胞进行检查，用于检查细胞核溶解情况。

检查细节、注意事项、步骤、结果解读

热盐水试验——检查项目的不适宜人群：

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热盐水试验——检查项目的注意细节：

不合宜人群：无。

检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。体检前一天的晚八时以后，应禁食。

检查时要求：

1.为保证获得完整的细胞核，第一是全程低温操作。第二是快速。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。

2.以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

3.进行WesternBlot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。

热盐水试验——检查项目的一般步骤：

1.样本处理：

a.组织匀浆：称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0mL预冷的LysisBuffer，再加入50ulReagentA，0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800*g5~10min离心收集细胞。计数。每次提取需要5*107个细胞，加入1.0mL冰预冷的LysisBuffer重悬细胞，再加入50ulReagentA，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。

2.将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700*g离心5min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5mL冰预冷的LysisBuffer重悬沉淀;

3.取另一新离心管内加入0.5mLMediumBuffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中，置于MediumBuffer之上，4℃，700*g离心5min。将上清转移到新离心管，细胞核沉淀在管底;

5.弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5mLLysisBuffer重悬细胞核沉，1000*g离心10min，弃上清，得较纯的细胞核沉淀;

6.用50-100μLStoreBuffer或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

热盐水试验——检查项目结果解读：

1.样本处理：

2.将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700*g离心5min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5mL冰预冷的LysisBuffer重悬沉淀;

5.弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5mLLysisBuffer重悬细胞核沉，1000*g离心10min，弃上清，得较纯的细胞核沉淀;

6.用50-100μLStoreBuffer或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。